摘要：目的研究圆齿野鸦椿Euscaphiskonishii的化学成分。方法采用硅胶柱色谱，凝胶柱色谱、制备高效液相色谱等分离技术进行分离纯化，利用现代波谱学手段进行化合物结构鉴定。结果从圆齿野鸦椿95%乙醇提取物的醋酸乙酯部位中分离得到8个化合物，分别鉴定为4(R)-(4′-羟基苯甲酰)二氢呋喃-2(3H)-酮（1）、6-hydroxymellein（2）、euscapholide（3）、去氢催吐萝芙木醇（4）、没食子酸乙酯（5）、tetraketide（6）、对羟基苯甲酸（7）、烟碱酸（8）。结论化合物1为新化合物，命名为圆齿野鸦椿内酯；除化合物3和6外，其余均为首次从该属植物中分离得到。

圆齿野鸦椿EuscaphiskonishiiHayata为省沽油科（Staphyleaceae）野鸦椿属EuscaphisSieb.etZucc.植物[1]，是民间常用的中草药，全株均可入药，具有祛风除湿、补中益气、利水消肿、活血化瘀等功效[2]，是血脉通胶囊中的重要药材之一。该植物在福建、江西、广东、湖南等地均有分布，尤以福建地区种植面积最大。据统计，福建南平、三明、泉州、宁德等地人工栽培面积达hm2，植物资源丰富[3]。本课题组一直致力于圆齿野鸦椿药用资源的开发与利用研究。前期，课题组综述了野鸦椿属化学成分并发现圆齿野鸦椿提取物有较好的抗炎活性[4]。现已从圆齿野鸦椿中分离得到近50个化合物，包括三萜类、色原酮碳苷类、木脂素类等[5-6]。课题组在前期研究的基础上，继续对圆齿野鸦椿的化学成分进行深入研究，从其枝条95%乙醇提取物的醋酸乙酯部位分离得到8个化合物，分别鉴定为4(R)-(4′-羟基苯甲酰)-二氢呋喃-2(3H)-酮[4(R)-(4′-hydroxybenzoyl)dihydrofuran-2(3H)-one，1]、6-hydroxymellein（2）、euscapholide（3）、去氢催吐萝芙木醇（dehydrovomifoliol，4）、没食子酸乙酯（ethylgallate，5）、tetraketide（6）、对羟基苯甲酸（p-hydroxybenzoicacid，7）、烟碱酸（nicotinicacid，8）。其中化合物1为新化合物，命名为圆齿野鸦椿内酯。除化合物3和6，其余化合物均为首次从该属中分离得到。该研究为圆齿野鸦椿植物资源的开发与利用提供理论依据。

1仪器与材料

1.1仪器

WatersW-QDA高效液相色谱仪-质谱联用仪（美国沃特世公司）；CPAD型电子分析天平（赛多利斯科学仪器北京有限公司）；BS-A自动部份收集器（上海沪西分析仪器厂有限公司）；WRR熔点仪（郑州南北仪器设备有限公司）；BS-D电子天平（赛多利斯科学仪器北京有限公司）；LC-20AP制备型高效液相色谱仪（日本岛津有限公司）；BrukerAV（MHz）核磁共振仪（德国布鲁克公司）；Agilent型高分辨质谱仪（美国安捷伦科技公司）；Nicoletimpact型傅里叶变换红外光谱仪（美国热电公司）。

1.2材料

SephadexLH-20凝胶（美国通用电气公司）；GF薄层色谱硅胶（青岛海洋化工有限公司）；PRP-A树脂（北京聚福树脂厂）；柱色谱硅胶（青岛海洋化工有限公司）；YMC-PackODS-A制备型反相色谱柱（mm×10mm，5μm，日本YMC公司）；DiamonsilC18分析型反相色谱柱（mm×4.6mm，5μm，北京迪马科技有限公司）；甲醇、乙醇、二氯甲烷、石油醚、醋酸乙酯（西陇化工有限公司）；色谱级甲醇、乙腈（默克公司）；10%硫酸-乙醇（美国CIL公司）。

圆齿野鸦椿样品于年11月，采自福建三明市清流县圆齿野鸦椿种植基地4～5年生枝条，经福建农林大学林学院邹双全教授鉴定为省沽油科野鸦椿属圆齿野鸦椿EuscaphiskonishiiHayata。腊叶标本（No.5）保于福建农林大学植物保护学院制药工程系样品室。样品采集后清洗、阴干、粉碎，过40目筛，保存备用。

2提取与分离

干燥的圆齿野鸦椿枝条粗粉10kg，用80L95%乙醇回流提取3次，每次3h，提取液减压浓缩得乙醇浸膏g。与硅藻土拌样；依次用石油醚、醋酸乙酯、乙醇萃取，分别得到石油醚部位、醋酸乙酯部位、乙醇部位。取醋酸乙酯部位（g）经硅胶（50～75μm）柱色谱，二氯甲烷-甲醇（∶0、50∶1、30∶1、20∶1、10∶1、5∶1、1∶1、0∶）依次梯度洗脱，得到16个馏份Fr.1～16。Fr.5（6.0g），经PRP树脂柱色谱分离，10%、30%、60%、95%乙醇溶液进行洗脱，得到5个组分（Fr.5.1～5.5），Fr.5.2（mg）经制备HPLC纯化（C18，30%甲醇，体积流量8.0mL/min，检测波长nm）得到化合物2（4.7mg）和3（10.6mg）。Fr.5.3（mg）经SephadexLH-20柱色谱以甲醇进行洗脱分离，收集馏份，通过TLC检测合并，得到3个组分（Fr.5.3.1～5.3.3）。Fr.5.3.3（mg）经制备HPLC纯化（C18，50%甲醇，体积流量8.0mL/min，检测波长nm）得到化合物1（2.8mg）和4（3.0mg）。Fr.9（2.5g）经PRP树脂柱色谱分离，10%、30%、60%、95%乙醇溶液进行洗脱，得到5个组分（Fr.9.1～9.5）。Fr.9.3（mg）经制备HPLC纯化（C18，20%乙腈，体积流量8.0mL/min，检测波长nm）得到化合物5（3.5mg）和6（6.5mg）。Fr.10（2.2g）经SephadexLH-20柱色谱以甲醇进行洗脱分离，收集馏份，通过TLC检测合并，得到8个组分（Fr.10.1～10.8）。Fr.10.7（mg）经制备HPLC纯化（C18，34%甲醇，体积流量8.0mL/min，检测波长nm）得到化合物7（6.0mg）和8（8.4mg）。

3结构鉴定

化合物1：无色油状物（氯仿），通过HR-ESI-MSm/z:.[M＋H]+（计算值.），可知化合物相对分子质量为，推断化合物分子式为C11H10O4，不饱和度为7。IR光谱图显示该化合物有羰基（、cm?1），羟基（cm?1），双键（cm?1）等特征吸收信号。

1H-NMR(MHz,DMSO-d6)谱中，在低场区出现4个不饱和芳氢信号δH7.87(2H,d,J=8.8Hz),6.87(2H,d,J=8.8Hz)，具有典型的AA′BB′分裂特征，推测该结构中存在苯环且为对位取代；存在2个亚甲基氢信号，其中1个为连氧亚甲基[δH4.57(1H,t,J=8.4Hz)和4.29(1H,dd,J=5.2,8.4Hz)]。13C-NMR(MHz,DMSO-d6)、DEPT及HSQC提示该化合物有11个碳信号，其中，4个季碳[2个羰基、1个α,β-不饱和羰基(δC.9)和1个酯羰基(δC.2)]，2个亚甲基，5个次甲基[4个sp2杂化δC.3(CH×2)和.6(CH×2)，1个sp3杂化δC41.2]。

该化合物的平面结构可进一步通过1H-1HCOSY、HMBC、HSQC进行确证。1H-1HCOSY谱（图1）中显示，H-3′和H-5′[δH6.87(2H,d,J=8.8Hz)]与H-2′和H-6′[δH7.87(2H,d,J=8.8Hz)]相关；在HMBC谱（图1）中，H-2′(δH7.87)与C-4′(δC.1),C-7′(δC.9)相关，H-5′(δH6.87)与C-1′(δC.2)相关，可确证苯甲酰结构，且对位有羟基取代。1H-1HCOSY谱（图1）中显示，H-3(δH2.84,2.69)、H-4(δH4.47)、H-5(δH4.57,4.29)依次相关；在HMBC谱（图2）中，H-3(δH2.84,2.69)与C-2(δC.2)相关，H-4(δH4.47)与C-7′(δC.9),H-5(δH4.57,4.29)与C-3(δC30.8),C-2(δC.2)相关，证实1个五元内酯环与羰基相连。因此，化合物1平面结构如图1所示。

化合物1中C-4具有手性，其构型通过五元饱和内酯八区律规则和计算CD进行确证。化合物1的CD谱显示[λmax(Δε)(+0.)]（图2），因此，C-4的绝对构型为R[7]。本试验运用ECD的方法进一步确证化合物1的绝对构型，采用TD-DFT方法进行构型优化和频率计算[8-9]，在甲醇中B3LYP/6-31G(d,p)基组水平构象，计算在B3LYP/6-31G(d,p)基组水平的30个激发态，C-4的R构型与实验CD基本一致（图2）。综上所述，化合物1鉴定为4(R)-(4′-羟基苯甲酰)二氢呋喃-2(3H)-酮，经Scifinder数据库检索，确定化合物1为新化合物，命名为圆齿野鸦椿内酯。1H-NMR和13C-NMR谱数据归属见（表1）。

化合物2：黄色油状物（氯仿），分子式为C10H10O4，ESI-MSm/z:[M－H]?，1H-NMR(MHz,DMSO-d6)δ:11.13(1H,s,8-OH),6.24(1H,d,J=2.0Hz,H-5),6.18(1H,d,J=2.4Hz,H-7),4.68(1H,m,H-3),2.92(1H,m,H-4a),2.80(1H,m,H-4b),1.38(3H,s,3-CH3)；13C-NMR(MHz,DMSO-d6)δ:.5(C-1),.5(C-6),.4(C-8),.3(C-4a),.8(C-5),.9(C-7),.1(C-8a),75.4(C-3),33.8(C-4),20.3(3-CH3)。以上波谱数据与文献报道基本一致[10]，故鉴定化合物2为6-hydroxymellein。

化合物3：黄色油状物（氯仿），分子式为C8H12O3，ESI-MSm/z:[M＋H]+，1H-NMR(MHz,DMSO-d6)δ:6.91(1H,m,H-4),6.02(1H,d,J=9.2Hz,H-3),4.64(1H,m,H-6),4.07(1H,m,H-8),2.41(2H,m,H-5),2.02(1H,dt,J=6.6,14.2Hz,H-7),1.77(1H,dt,J=4.4,14.2Hz,H-1),1.26(3H,d,J=6.2Hz,H-9)；13C-NMR(MHz,DMSO-d6)δ:.2(C-1),.4(C-6),.1(C-5),77.1(C-3),65.1(C-8),43.6(C-4),29.4(C-7),23.6(C-9)。以上波谱数据与文献报道基本一致[11]，故鉴定化合物3为euscapholide。

化合物4：黄色油状物（甲醇），分子式为C13H18O3，ESI-MSm/z:[M＋H]+。1H-NMR(MHz,DMSO-d6)δ:6.89(1H,d,J=16.0Hz,H-7),6.27(1H,d,J=15.6Hz,H-8),5.86(1H,m,H-4),2.63(1H,m,H-2a),2.26(3H,s,H-10),2.15(1H,d,J=16.8Hz,H-2b),1.88(3H,s,H-13),0.95(3H,s,H-11),0.91(3H,s,H-12)；13C-NMR(MHz,DMSO-d6)δ:.3(C-9),.1(C-3),.7(C-5),.2(C-7),.5(C-8),.6(C-4),78.2(C-6),49.3(C-2),41.2(C-1),27.3(10-CH3),24.2(12-CH3),23.2(11-CH3),18.6(13-CH3)。以上波谱数据与文献报道基本一致[12]，故鉴定化合物4为去氢催吐萝芙木醇。

化合物5：白色粉末（甲醇），分子式为C9H10O5，ESI-MSm/z:[M＋H]+；1H-NMR(MHz,DMSO-d6)δ:6.94(2H,s,H-2,6),4.20(2H,q,J=6.8Hz,-CH2),1.28(3H,s,-CH3)；13C-NMR(MHz,DMSO-d6)δ:.6(C-7),.5(C-3,5),.5(C-4,6),.7(C-4),.8(C-1),.0(C-2,6),61.7(-CH2),14.6(CH3)。以上波谱数据与文献报道基本一致[13]，故鉴定化合物5为没食子酸乙酯。

化合物6：黄色油状物（甲醇），分子式为C8H12O3，ESI-MSm/z:[M＋H]+。1H-NMR(MHz,DMSO-d6)δ:4.88(1H,q,J=2.0,H-6),4.35(1H,brs,H-4),3.93(1H,m,H-8),2.89(1H,s,H-3a),2.77(1H,dd,J=2.0,19.2Hz,H-3b),1.93(1H,m),1.55(1H,dt,J=2.2,18.4Hz,H-7b),1.22(3H,d,J=6.0Hz,H-9)；13C-NMR(MHz,DMSO-d6)δ:.5(C-2),72.6(C-6),65.3(C-4),61.4(C-8),38.1(C-7),36.1(C-3),28.7(C-5),21.3(C-9)。以上波谱数据与文献报道一致[14]，故鉴定化合物6为tetraketide。

化合物7：黄色油状物（甲醇），分子式为C7H6O3，ESI-MSm/z:[M＋H]+，1H-NMR(MHz,DMSO-d6)δ:12.37(1H,brs,COOH),10.22(1H,brs,OH),7.78(2H,d,J=8.8Hz,H-3,5),6.78(2H,d,J=8.8Hz,H-2,6)；13C-NMR(MHz,DMSO-d6)δ:.2(-COOH),.6(C-1),.6(C-2,6),.2(C-3,5),.4(C-4)。以上波谱数据与文献报道基本一致[15]，故鉴定化合物7为对羟基苯甲酸。

化合物8：白色粉末（甲醇），分子式为C7H5NO2，ESI-MSm/z:[M＋H]+。1H-NMR(MHz,DMSO-d6)δ:9.07(1H,d,J=2.0Hz,H-2),8.78(1H,dd,J=1.6,4.8Hz,H-5),8.26(1H,dt,J=8.0,1.6Hz,H-4),7.54(1H,dd,J=8.0,4.8Hz,H-6)；13C-NMR(MHz,DMSO-d6)δ:.3(C-7),.2(C-6),.8(C-2),.8(C-4),.3(C-3),.8(C-5)。以上波谱数据与文献报道基本一致[16]，故鉴定化合物8为烟碱酸。

参考文献（略）

来源：陈景新，张丽媛，倪林，吴美婷，张琳婧，肖晓梅，李玉权，邹双全．圆齿野鸦椿中1个新的内酯类化合物[J].中草药,,51(18):-.